Zestaw do przygotowania żelu SDS-PAGE

 

Nazwa produktu	Nr kat.	Spec.
Zestaw do przygotowania żelu SDS-PAGE	G2003-50T	50 T

 

 

Zestaw do przygotowania żelu SDS-PAGE zawiera wszystkie odczynniki potrzebne do przygotowania żelu. Użytkownicy muszą jedynie przygotować niewielką ilość czystej wody i sprzętu do wytwarzania żelu (podstawa do klejenia, płytka szklana, grzebień itp.) i postępować zgodnie z instrukcjami, aby wytworzyć wymagany żel. Z tego zestawu można przygotować co najmniej 50 żeli o regularnej wielkości.

 

 

Statek z mokrym lodem; Koagulant modyfikowany przechowywany w temperaturze -20, inne przechowywane w temperaturze 2-8 stopnia z dala od światła, ważny 12 miesięcy.

 

 

Numer komponentu	Część	G2003-50T
G2003-1	1,5 M Tris-HCl (pH 8,8)	100 ml
G2003-2	30% Akryloamid-Bisakryloamid (29:1)	100 ml
G2003-3	1.0 M Tris-HCl (pH 6,8)	20 ml
G2003-4	10% SD	5 ml
G2003-5	Katalizator zestalania żelu PAGE	1 ml
G5036-5ML	Zmodyfikowany koagulant	1 ml×5
Podręcznik		1 szt

 

 

1. W zależności od masy cząsteczkowej docelowego białka i wybranego buforu do elektroforezy dobierz odpowiednie stężenie żelu do separacji SDS-PAGE, jak pokazano w poniższej tabeli:

Stężenia żelu rozdzielającego SDS-PAGE	Optymalny zakres separacji (kDa) (Bufor do elektroforezy Tris-Glicyna, G2018)	Optymalny zakres separacji (kDa) (Bufor do elektroforezy SWE o wysokiej rozdzielczości, G2081)
6%	50-300	15-300
8%	30-130	10-250
10%	20-100	5-150
12%	10-60	3-100
15%	<40	<60

 

2. W zależności od masy cząsteczkowej docelowego białka dobierano stężenie żelu rozdzielającego. Biorąc za przykład typową specyfikację płytki żelowej o wymiarach 8,3 cm x 7,3 cm (pojedynczy blok), roztwór do przygotowania żelu można przygotować zgodnie z poniższą tabelą:

Stężenia żelu rozdzielającego (%)	6%			8%			10%			12%			15%
Grubość płyty szklanej	0,75 mm	1,0 mm	1,5 mm	0,75 mm	1,0 mm	1,5 mm	0,75 mm	1,0 mm	1,5 mm	0,75 mm	1,0 mm	1,5 mm	0,75 mm	1,0 mm	1,5 mm
Całkowita wymagana ilość kleju* (ml)	4.0	6.0	8.0	4.0	6.0	8.0	4.0	6.0	8.0	4.0	6.0	8.0	4.0	6.0	8.0
H2O(ml)	2.1	3.18	4.24	1.85	2.78	3.7	1.59	2.38	3.17	1.32	1.98	2.64	0.92	1.38	1.84
30% Akryloamid-Bisakryloamid (29:1) (ml)	0.8	1.2	1.6	1.07	1.6	2.14	1.33	2.0	2.67	1.6	2.4	3.2	2.0	3.0	4.0
1,5 M Tris-HCl (pH 8,8) (ml)	1.0	1.5	2.0	1.0	1.5	2.0	1.0	1.5	2.0	1.0	1.5	2.0	1.0	1.5	2.0
10% SDS (μL)	40	60	80	40	60	80	40	60	80	40	60	80	40	60	80
Zmodyfikowany koagulant (µL)	40	60	80	40	60	80	40	60	80	40	60	80	40	60	80
Katalizator do zestalania żelu PAGE (μL)	4.0	6.0	8.0	4.0	6.0	8.0	4.0	6.0	8.0	4.0	6.0	8.0	4.0	6.0	8.0

* Całkowita objętość roztworu do przygotowania żelu nie obejmuje objętości katalizatora zestalania żelu PAGE

 

3. Sposób przygotowania żelu układającego można znaleźć w poniższej tabeli:

Układanie stężeń żelu (%)	5%
H2O(ml)	1.93	2.95	3.86	5.79
30% Akryloamid-Bisakryloamid (29:1) (ml)	0.5	0.75	1.0	1.5
1.0M Tris-HCl (pH 6,8) (ml)	0.5	0.75	1.0	1.5
10% SDS (μL)	40	60	80	120
Zmodyfikowany koagulant (μL)	18	27	36	54
Katalizator do zestalania żelu PAGE (μL)	4	6	8	12
Całkowita objętość* (ml)	3	4.5	6.0	9.0

* Całkowita objętość nie obejmuje objętości katalizatora zestalania żelu PAGE.

 

4. Zalecane warunki elektroforetyczne:

a) Stosowanie szybkiego buforu do elektroforezy o wysokiej rozdzielczości SWE (G2081) do elektroforezy: 200-250 V stałe ciśnienie, 25-35 min, aby zakończyć elektroforezę;

b) Do elektroforezy stosuje się bufor do elektroforezy Tris-Glycine (G2018): napięcie górnego żelu ustawia się na 90 V, a elektroforeza trwa około 30 min (marker wnika do żelu rozdzielającego); Napięcie regulacji dolnego żelu wynosi 150-180 V, około 60-90 min (można dostosować w zależności od aktualnej sytuacji).

 

 

1. Przed użyciem wszystkie odczynniki należy ponownie ogrzać do temperatury pokojowej.

2. W porównaniu z nadsiarczanem amonu (AP) ulepszony koagulant ma lepszą stabilność. Wyjmij jeden do użycia i przechowuj go w temperaturze 4 stopni po użyciu do kolejnego rutynowego użytku, który można przechowywać przez sześć miesięcy. Jeśli nie będzie używany przez dłuższy czas, należy go przechowywać w temperaturze -20, aby uniknąć wielokrotnego zamrażania i rozmrażania.

3. Do separacji białek o masach mniejszych niż 10 kDa zalecany jest żel trycynowy; żele akryloamidowe mogą nie wystarczyć do separacji.

4. Temperatura ma istotny wpływ na czas żelowania kleju. Aby zapewnić płynny przebieg eksperymentu, ogólnie rzecz biorąc, niższe temperatury powodują dłuższy czas żelowania i może być konieczne odpowiednie zwiększenie dawki modyfikowanego koagulanta. Z drugiej strony wyższe temperatury prowadzą do szybszego żelowania, dlatego można odpowiednio zmniejszyć dawkę modyfikowanego koagulantu.

5. Żel wymaga odpowiedniego czasu krzepnięcia, dlatego zaleca się, aby żel był całkowicie przygotowany i pozostawiony do dokładnego zżelowania.

6. Gdy temperatura jest niska, 10% roztwór SDS powoduje wytrącanie się krystalizacji i może być stosowany po przetopieniu w temperaturze 37 stopni.

7. Jeśli potrzebujesz zestawu odczynników do szybkiego przygotowania żelu kolorowego, możesz kupić inne produkty naszej firmy, takie jak SDS-PAGE Fast Acrylamide Kit (G2037), lub serię superszybkiego zestawu do przygotowania kolorowego żelu (G2041 / G2042 / G2043 G2044 / G2045 / G2060 / G2061 / G2062 / G2063 / G2064) i wysokie Seria ultraszybkich zestawów do przygotowania kolorowego żelu o rozdzielczości (G2066/G2067/G2068, G2071/G2072/G2073), może spełniać różne potrzeby eksperymentalne.

8. Dla własnego bezpieczeństwa i zdrowia podczas pracy należy nosić fartuch laboratoryjny i rękawiczki jednorazowe.

 

Tylko do użytku badawczego!

 

 

Popularne Tagi: zestaw do przygotowania żelu sds-page, Chiny producenci, dostawcy, fabryka zestawu do przygotowania żelu sds-page