Zestaw do genomowego DNA roślin dla polisacharydów i polifenoli

 

Nazwa produktu	Nr kat.	Spec.
Zestaw do genomowego DNA roślin dla polisacharydów i polifenoli	G3643-50T	50 T

 

 

Zestaw został specjalnie zaprojektowany do bezpiecznej, szybkiej i wydajnej ekstrakcji genomowego DNA o wysokiej czystości z próbek grzybów i różnych złożonych tkanek roślinnych, które są bogate w polisacharydy i polifenole. Układ buforu do lizy został starannie zoptymalizowany, aby nie tylko bezpośrednio rozdrabniać i lizować próbki tkanek roślinnych, ale także skutecznie usuwać zanieczyszczenia, takie jak polisacharydy, polifenole i białka. Cały proces można zakończyć w ciągu 1 godziny, a wyekstrahowany genomowy DNA o wysokiej czystości można wykorzystać do różnych eksperymentów z zakresu biologii molekularnej, w tym PCR, reakcji trawienia enzymatycznego, hybrydyzacji Southern, RAPD, AFLP, RFLP i innych.

 

 

RNaza A jest transportowana z mokrym lodem i przechowywana w temperaturze -20; Inne odczynniki są transportowane i przechowywane w temperaturze pokojowej; ważny przez 12 miesięcy.

 

 

Numer komponentu	Część	G3643-50T
G3643-1	Bufor PGLA	40ml
G3643-2	Bufor PGLB	8 ml
G3643-3	Bufor GB	12ml
G3643-4	Bufor GD	12ml
G3643-5	Bufor PW	24 ml
G3643-6	RNaza A	500 μL
G3643-7	Kolumny wirujące DNA	50
G3643-8	Rurki zbiorcze	50
G3643-9	Bufor TE	10 ml
Podręcznik		Jeden egzemplarz

 

 

1. Kriokonserwowane próbki roślin powinny unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania, w przeciwnym razie jakość i wydajność ekstrahowanego DNA ulegną pogorszeniu.

2. Jeśli bufor PGLA wytrąci się, należy go podgrzać w temperaturze 65 stopni i użyć po przywróceniu temperatury pokojowej.

3. Przed użyciem dodać 28 mL izopropanolu do Buffer GB i dobrze wymieszać.

4. Przed użyciem należy dodać 18 mL etanolu absolutnego do Buffer GD i 56 mL etanolu bezwodnego do Buffer PW.

5. Początkowa ilość próbek tkanek roślinnych ma duży wpływ na efekt ekstrakcji gDNA. Jeżeli początkowa ilość jest zbyt duża, jakość ekstrakcji i względna wydajność gDNA ulegną pogorszeniu. Przed rozpoczęciem doświadczenia należy zapoznać się z poniższą Tabelą 1, aby zapoznać się ze stosowaniem buforu PGLA i buforu PGLB odpowiadającego różnej początkowej ilości próbek tkanek roślinnych.

 

Tabela 1. Zastosowanie buforu PGLA i buforu PGLB odpowiadające różnej początkowej ilości próbek tkanek roślinnych

Wykorzystanie próbek tkanek roślinnych	Użycie bufora PGLA	Użycie bufora PGLB
Mniejsza lub równa 50 mg	500 μL	100 μL
50 ~ 200 mg	750 μL	150 μL

 

 

1. Liza tkanek roślinnych:

A. (Zalecane) Dodaj wcześniej odpowiednią ilość buforu PGLA (zalecane użycie w Tabeli 1) do probówki mielącej o pojemności 2,0 ml niezawierającej nukleaz (zalecana HT-200-M), a następnie dodaj 3~{ Koraliki ze stali nierdzewnej {6}} mm (zalecane G0104-200G). Następnie szybko przenieś 50~100 mg świeżej lub kriokonserwowanej tkanki roślinnej do probówki mielącej. Umieść rurkę mielącą na młynku (zalecany KZ-5F-3D) i postępuj zgodnie z zalecaną procedurą mielenia: ustaw częstotliwość na 70 Hz, szlifuj każdorazowo przez 30 sekund, powtarzając proces 15~20 razy z 5-sekundową przerwą pomiędzy każdym mieleniem. Jeśli próbka jest trudna do zmielenia, np. nasiona, można wydłużyć czas mielenia do 30 lub więcej. Jeśli tkanka nie zostanie dokładnie homogenizowana, będzie to miało wpływ na wydajność i jakość DNA. Po zakończeniu mielenia dodać 10 µl RNazy A do probówki mielącej, wymieszać zawartość do góry nogami i inkubować w temperaturze 65 stopni przez 15 minut, mieszając do góry nogami co 5 minut.

B. Szybko przenieś świeżą lub kriokonserwowaną tkankę roślinną do 2,0 ml probówki do mielenia wolnej od nukleaz (zalecana HT-200-M) zawierającej kulki tlenku cyrkonu 3~4 3 mm (zalecane G{{6} }G) i wstępnie ochłodzono ciekłym azotem. Rurę mielącą należy umieścić na młynku (zalecane KZ-5F-3D) (przed założeniem rurki mielącej szybko schłodzić adapter w ciekłym azocie) i mielić do całkowitego rozdrobnienia (jeśli chusteczka nie jest całkowicie zmielone na proszek, będzie to miało wpływ na wydajność i jakość DNA). Następnie dodać odpowiednią ilość Buffera PGLA (zalecane użycie w Tabeli 1) i ponownie nałożyć na młynek na 1 min. Po zakończeniu mielenia dodać 10 µl RNazy A do probówki mielącej, wymieszać zawartość do góry nogami i inkubować w temperaturze 65 stopni przez 15 minut, mieszając do góry nogami co 5 minut.

2. Dodać odpowiednią ilość buforu PGLB (zalecane użycie w Tabeli 1) do probówki wirówkowej, szybko odwrócić i dobrze wymieszać, a następnie umieścić na lodzie na 5 min.

3. Wiruj przy 12,000 obr./min przez 5 min w temperaturze 4 stopnie, przenieś supernatant do nowej probówki wirówkowej o pojemności 1,5 mL (jeżeli w uzyskanym supernatancie nadal znajduje się pływająca substancja, konieczne jest odwirowanie w temperaturze 12,{ {8}} obr/min przez 2 minuty ponownie w 4 stopniach i przenieść supernatant do innej nowej probówki wirówkowej o pojemności 1,5 ml).

4. Do probówki wirówkowej dodać bufor GB o tej samej objętości co supernatant i wymieszać do góry nogami.

5. Umieść kolumnę wirówkową DNA na probówce zbierającej i przenieś mieszaninę do kolumny wirówkowej DNA. Każde dodanie nie przekracza 600 µl, w przypadku przekroczenia tej ilości można dodawać partiami.

6. Wiruj przy 12,000 obr./min przez 1 minutę w temperaturze pokojowej i wyrzuć przesącz. Włóż kolumnę wirówkową DNA z powrotem do probówki zbierającej.

7. Dodaj 500 μl buforu GD do kolumny wirówkowej DNA i wiruj przy 12000 obr./min przez 1 minutę w temperaturze pokojowej, a następnie wyrzuć przesącz.

8. Dodaj 600 μl buforu PW do kolumny wirowania DNA (proszę dodać bufor PW wzdłuż ścianki rurki, aby pomóc wypłukać resztki soli ze ścianek rurki) i wirować przy 12,000 obr/min przez 1 min w temperaturze pokojowej, następnie wyrzucić filtrat.

9. Powtórz krok 8.

10. Umieść kolumnę wirówkową DNA w probówce zbierającej, wiruj przy 12,000 obr./min przez 2 minuty w temperaturze pokojowej, aby usunąć pozostały płyn.

11. Przenieść kolumnę wirówkową do nowej, wolnej od nukleaz probówki wirówkowej o pojemności 1,5 mL, odstawić w temperaturze pokojowej na 3~5 minut, aby resztkowy etanol z kolumny wirówkowej mógł całkowicie odparować.

12. Dodaj 50~100 µl buforu TE lub wody wolnej od nukleaz do probówki wirówkowej, odstaw w temperaturze pokojowej na 5 minut (podgrzanie buforu TE lub wody wolnej od nukleaz do 65 stopni jest korzystne dla poprawy wydajności elucji).

13. Wiruj przy 12,000 obr/min przez 2 minuty w temperaturze pokojowej, aby zebrać DNA. Aby uzyskać wyższe stężenie DNA, można także dodać pierwszy eluent z powrotem do DNA Spin Column, następnie odstawić w temperaturze pokojowej na 5 minut i wirować przez 2 minuty w temperaturze pokojowej, aby ponownie zebrać DNA.

 

 

1. Spróbuj użyć świeżej tkanki roślinnej, aby zapewnić wydajność i integralność genomowego DNA.

2. W celu długotrwałej konserwacji wyekstrahowany DNA należy eluować buforem TE i przechowywać w temperaturze -80.

3. Uzyskanego genomowego DNA należy unikać wielokrotnego zamrażania i rozmrażania.

4. Jeżeli bufor do lizy jest bardzo lepki, zaleca się zmniejszenie początkowej wielkości próbki lub zwiększenie ilości buforu do lizy.

5. W przypadku próbek o większej zawartości wody można odpowiednio zwiększyć początkową wielkość próbki.

Harmonogram

Wydajność genomowego DNA ekstrahowanego z próbek różnych roślin i grzybów za pomocą tego zestawu pokazano w poniższej tabeli. Wydajność genomowego DNA jest powiązana z gatunkiem rośliny, organami i stanem wzrostu. Zalecane dozowanie próbek przedstawiono w poniższej tabeli.

 

Próbka	Dawkowanie	Wydajność DNA
Liść miłorzębu japońskiego	100 mg	5 ~ 10 ug
Liść Gossypium hirsutum	50 mg	5 ~ 10 ug
Liść Arachisa hipogaea	50 mg	5 ~ 10 ug
Liść Solanum lycopersicum	70 mg	5 ~ 10 ug
Nasiona Gossypium hirsutum	100 mg	10 ~ 30 ug
Nasiona Arachisa hipogaea	100 mg	3~5 ug
Bulwa Solanum tuberosum	100 mg	0.3~3 ug
Nasiona Triticum aestivum	100 mg	10 ~ 30 ug
Nasiona Carthamus tinctorius	100 mg	5 ~ 10 ug
Liść Schotta Filodendron bipinnatifidum	100 mg	5 ~ 10 ug
Liść sosny	100 mg	10~15 ug
Liść Cupressus funebris	100 mg	15~30 ug
Liść Bryophyllum pinnatum	100 mg	0.5~2 ug
Pleurotus ostreatus	100 mg	0.5 ~ 1,5 ug
Liść aloesu	200 mg	0.5~2 ug
Owoce Solanum lycopersicum	300 mg	0.5 ~ 1,5 ug

 

Tylko do użytku badawczego!

 

 

Popularne Tagi: zestaw genomowego DNA roślin dla polisacharydów i polifenoli, Chiny Zestaw genomowego DNA roślin dla polisacharydów i polifenoli producentów, dostawców, fabryka