Bufor do lizy czerwonych krwinek

Bufor do lizy czerwonych krwinek (bufor do lizy ACK) to klasyczny roztwór do lizy przeznaczony do usuwania czerwonych krwinek bez uszkadzania komórek jądrzastych. Lizat erytrocytów powoduje lizę komórek tkanek niezawierających erytrocytów i może być dalej stosowany do hodowli pierwotnej, fuzji komórek, analizy metodą cytometrii przepływowej, separacji i ekstrakcji kwasów nukleinowych i białek. Podstawową zasadą jest liza erytrocytów poprzez wykorzystanie różnicy w osmolarności wewnątrzkomórkowej w celu spowodowania pęcznienia błony komórkowej. Główne składniki to chlorek amonu, wodorowęglan potasu i EDTA-Na2. Jony amonowe nie mogą przechodzić przez błonę komórkową, podczas gdy inne jony mogą, co powoduje różnicę w stężeniu jonów pomiędzy wnętrzem i na zewnątrz komórki oraz dyfuzję wody z zewnątrz do komórki, powodując pęcznienie czerwonych krwinek i osiąganie efekt lizy. Produkt jest filtrowany i sterylizowany przez membranę filtrującą 0,2 µm.

Statek z mokrym lodem; Przechowywać w temperaturze 2-8, ważne 12 miesięcy.

Próbki tkanek/komórek:

1. Świeża tkanka jest trawiona przez trypsynę lub kolagenazę i dyspergowana w zawiesinie poszczególnych komórek. Wiruj przy 300-400 g przez 5 minut w temperaturze 4 stopni i odrzuć supernatant.

2. Do wytrąconych komórek dodać bufor do lizy czerwonych krwinek w stosunku 1:3-5, wymieszać delikatnie wdmuchując i poddawać lizie przez 1-2 min.

3. Wiruj przy 800-1000 obr/min przez 5-8 min w temperaturze 4 stopni, następnie odrzuć czerwony supernatant. Powtórz kroki 2 i 3, jeśli liza nie jest kompletna.

4. Komórki ponownie zawieszono, dodając 3-5 ml roztworu Hanka lub pożywki hodowlanej niezawierającej surowicy do wytrąconej frakcji, a następnie wirowano przy 300-400 g przez 3-5 min w temperaturze 4°C. Ten etap powtórzono 2-3 razy w celu przemycia komórek.

5. Komórki ponownie zawieszono w odpowiednim roztworze wymaganym do kolejnych eksperymentów; Do ekstrakcji RNA zaleca się użycie roztworu przygotowanego z wodą DEPC na początku etapu 4.

1. Świeżą krew z antykoagulantem, supernatant odrzucić po odwirowaniu.

2. Oszacuj wstępnie objętość wytrącania komórek i dodaj do wytrącania komórek wstępnie schłodzony bufor do lizy czerwonych krwinek o 2-8 stopniach w stosunku 1:6-10. Na przykład, aby uzyskać 0,2 ml wytrącenia komórek, dodać 1,2-2,0 ml buforu do lizy czerwonych krwinek, delikatnie przedmuchać w celu wymieszania i poddać lizie przez {{11} } min w temperaturze 4 stopni lub temperaturze pokojowej.

3. Wiruj przy 800-1000 obr/min przez 5-8 min w temperaturze 4 stopni, następnie odrzuć czerwony supernatant. Jeśli liza erytrocytów nie jest kompletna, powtórz jeden raz kroki 2 i 3;

4. Komórki ponownie zawieszano, dodając roztwór Hanka lub pożywkę hodowlaną wolną od surowicy do wytrąconej frakcji, a następnie wirowano przy 300-400 g przez 3-5 min w temperaturze 4°C. Ten etap powtórzono 2-3 razy w celu przemycia komórek;

5. Komórki ponownie zawieszono w odpowiednim roztworze wymaganym do kolejnych eksperymentów; Do ekstrakcji RNA zaleca się użycie roztworu przygotowanego z wodą DEPC na początku etapu 4.

1. Ten produkt został przefiltrowany i wysterylizowany. Należy zwrócić uwagę na zachowanie aseptyki, aby uniknąć skażenia.

2. Jeżeli badanie kontrolne przeprowadza się w hodowli komórkowej, operację należy przeprowadzić na wyjątkowo czystym stole, zwracając uwagę na zachowanie aseptyki, aby uniknąć zanieczyszczenia komórek i wpływu na hodowlę komórkową.

3. Jeżeli po odwirowaniu zostanie wykryta bardzo mała ilość erytrocytów, badanie można kontynuować bez wpływu na późniejsze wykrywanie.

4. Dla własnego bezpieczeństwa i zdrowia należy nosić okulary, rękawice lub odzież ochronną.

Tylko do użytku badawczego!

Popularne Tagi: bufor do lizy czerwonych krwinek, Chiny producenci, dostawcy, fabryka bufor do lizy czerwonych krwinek